L'AUTORADIOGRAPHIE

Objectifs et principes

Afin de localiser les marqueurs radioactifs utilisés par une cellule ou un tissu, on utilise leur propriété à émettre des rayonnements qui impressionnent, par exemple, des films photographiques. En effet, les rayons émis par exemple par 3H et 14C sont constitués d'électrons libérés à très grande vitesse, qui réduisent les grains d bromure d'argent contenus dans l'émulsion en grains d'argent métallique (Ag) selon la réaction suivante : Ag+ + e- --> Ag Ceux-ci se localisent alors au-dessus des structures ayant incorporé des atomes radioactifs.

Mise en oeuvre

On incorpore un précurseur marqué à un milieu de culture de cellules ou bien on injecte la substance contenant la molécule marquée à un organisme vivant.

- Après biopsie d'un organe et fixation de celui-ci, ou des cellules servant à l'expérimentation, on réalise des coupes fines ( s'il s'agit d'observations à l'échelle cellulaire).

- on rince les traces de produits radioactifs qui pourraient impressionner l'émulsion photographique de façon parasite.

- On colle alors la coupe sur une lame de verre et on coule sur l'ensemble une émulsion photographique, c'est-à-dire une suspension de gélatine et de bromure d'argent.

- On place l'ensemble à l'obscurité, de quelques jours à plusieurs semaines selon le type d'isotope et de matériel vivant choisis. L'émulsion photographique est alors précisément impressionnée à l'aplomb des éléments radioactifs qui se sont désintégrés.

- On révèle alors le film. Des petites taches noires, correspondant aux grains d'argent, apparaissent aux endroits où étaient localisées les molécules radioactives. Il suffit alors de comparer la localisation de ces taches et une image du tissu ou de la cellule étudié pour déterminer la localisation exacte du produit contenant les atomes radioactifs.

Quelques domaines d'utilisation des marqueurs radioactifs

- mise en évidence d'une synthèse ou d'un renouvellement de molécule

- mécanismes de la réplication et de la transcription de l'ADN

- localisation des étapes de la synthèse des protéines - localisation de la mise en réserve de molécules chez les organismes vivants - localisation des récepteurs de certaines hormones et neurotransmetteurs.